关于动物胃肠正常菌群的研究报道很多,但细菌性腹泻的却甚少。猫的肠道内有大量潜在的致病菌,但不是每种细菌都与临床疾病有明确的联系。致病菌包括:肠致病性大肠埃希氏菌、无致病性大肠杆菌、沙门氏菌属、小肠结肠炎耶尔森菌、弯曲菌属、毛状芽孢杆菌、梭菌属、葡萄球菌和志贺菌属,其中以由大肠杆菌引起的最为常见。研究发现除了新生仔畜大肠杆菌病和出血性胃肠炎外,还有一些细菌,如沙门氏菌、弯曲菌能引起腹泻综合症。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验药物 呋喃妥因、头孢氨苄、环丙沙星、庆大霉素、卡那霉素、林可霉素、氧氟沙星、诺氟沙星、氯霉素、菌必治等药敏纸片。
1.1.2 试验器材 培养基、恒温培养箱、超净工作台、接种环、酒精灯等。
1.1.3 试验试剂 糖类、磷酸氢二钾、氯化钠、琼脂、胆盐、超纯水、中性红、结晶紫、蛋白胨、伊红-Y、美蓝、硫化氢、苯丙氨酸、枸橼酸盐、尿素、赖氨酸、鸟氨酸、棉子糖、山梨醇、木胶糖等。
1.2 试验方法
1.2.1 粪便采集 挑选腹泻猫,排除病毒性、寄生虫性和其他条件性腹泻,确诊为细菌性腹泻后,用无菌棉签采集患病猫的新鲜粪便10份;再采集10只临床健康的猫作对照。
1.2.2 细菌培养 将采集的20份样品在超净工作台上分别接种到普通培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基上,并且标明接种的编号。接种完后将培养皿放入37℃恒温培养箱培养18~24h,观察3种培养基上菌落的形态结构和颜色特点。根据菌落形态及颜色进行分离培养。
1.2.3 生化鉴定 使用精氨酸、鼠李糖、乳糖、水杨素、甘露醇、蔗糖、七叶苷、半乳糖、果糖、山梨醇、葡萄糖、懒氨酸、麦芽糖、阿拉伯糖、棉籽糖、木糖、卫矛醇、甲基红实验、V-P试验、吲哚等分别配制生化鉴定管。将培养皿中纯化的典型菌种在超净工作台上接种至生化鉴定管中,24h后观察结果。
1.2.4 药敏试验 将纯化所得的细菌接种于普通培养基上,干燥后贴上药敏试剂片,37℃恒温培养18~24h观察结果,用游标卡尺测量抑菌圈直径。
2 试验结果与分析
2.1 接种培养结果
接种病猫粪便的麦康凯培养基中均有均匀红色,边缘整齐,中心突起,中等大小,表面光滑湿润的散在菌落长出,疑似大肠杆菌。
2.2 生化试验结果
这些细菌均能够分解麦芽糖、果糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖、乳糖、山梨酸,产酸产气,不能产生硫化氢,因此判断为大肠杆菌。
2.3 药敏试验结果
分离的大肠杆菌对头孢类、喹诺酮类抗生素高度敏感,对林可霉素、四环素、庆大霉素不敏感
3 讨论
生化试验结果与参考资料大肠杆菌特性相符,确定引起猫腹泻的细菌是大肠杆菌,而且与一些研究的试验结果相一致。从药敏试验的结果看,细菌对头孢类、喹诺酮类抗生素高度敏感,对林可霉素、四环素、庆大霉素不敏感,与有关的报道相符。说明大肠杆菌已对一些常用的药物产生耐药性。通过对引起猫细菌性腹泻的细菌与健康猫的常规肠道菌进行对比发现,正常猫肠道内存在着许多细菌,涉及菌种包括链球菌、葡萄球菌、棒状杆菌、埃希菌、双歧杆菌、拟杆菌、乳
杆菌、梭菌、念珠菌、青霉菌、地霉菌、毛霉菌与链格孢霉等。而引起这次细菌性腹泻的细菌培养后主要得到的是大肠杆菌,说明了这些猫的细菌性腹泻主要是由致病性大肠杆菌引起的。
4 结论
通过对10只确诊患细菌性腹泻猫的粪样进行分离及生化得出引起猫腹泻的致病菌主要是大肠杆菌。药敏试验结果表明,这类大肠杆菌除对头孢类、奎诺酮类的抗生素较敏感外,对其他抗菌药物如氨苄青霉素、红霉素、链霉素等具有不同程度的抗药性。
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